程：      :

大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群測試片

1.適用范圍：適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗

2.方法原理：耐熱大腸菌群（thermotoletant coliform  bacteria）是總大腸菌群的一部分．將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群被稱為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。其中大腸埃希氏菌（E.coli） 是zui準確和專一的糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出，說明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片運用酶底物技術，含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶（glucuronidase）的顯色底物（XGLUC/blue），以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶（galactosidase）的顯色底物（SalmonGal/red）, 經過44.5℃培養(yǎng)后，大腸埃希氏菌顯紫藍色，紅色或紫藍色菌斑都屬耐熱大腸菌群。
3 操作方法

3.1對于大腸菌群檢驗顯示陽性的紙片或產酸產氣的發(fā)酵管，用接種環(huán)挑取菌液，轉入2－3mL無菌水中混勻，用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測試片上，然后放下上層膜，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。

3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，44.5℃培養(yǎng)15～24h觀察結果。

4 結果判讀: 測試片上出現紅色或紫藍色菌斑都是耐熱大腸菌群陽性，其中紫藍色為大腸埃希氏菌陽性。沒有紅色或紫藍色斑點為陰性結果。

致病菌檢測試劑盒使用說明

1適用范圍：適用于生活飲用水、水源水及食品中致病性沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、致瀉大腸埃希氏菌（含腸出血性大腸桿菌O157:H7）、臘樣芽孢桿菌、板奇腸桿菌檢測的檢測以及大腸菌群污染程度的檢測。

2方法原理：依據國標GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技術將相對應培養(yǎng)基包被在試劑盒底部，隨時取用。

3樣品稀釋：同國標法。液體樣品取原液。固體或半固體樣品用滅菌生理鹽水配制成1:10和1:100的稀釋液。

4 致病菌檢測

4.1加樣：用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml～10 ml（不得少于4ml）分別加入到標號為1、2、3、A、B、C的增菌格（孔）內。加樣后的1、2、3號分別為副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、板奇腸桿菌增菌液；A、B、C分別為金黃色葡萄球菌、沙門菌、臘樣芽孢桿菌增菌液。

4.2培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)18小時。

4.3 觀察結果：如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁，即預示含有此種致病菌?？砂磭鴺朔ㄟM一步檢測。也可取陽性菌液1mL，加入到含有9 mL滅菌生理鹽的試管內，混勻，取1mL，接種到相對應的測試片上，36℃±1℃培養(yǎng)18小時加以驗證。

5大腸菌檢測

5.1加樣：將試劑盒放在試驗臺面上，打開盒蓋，用滅菌吸管分別吸取3個原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標號為4、5、6的小培養(yǎng)基孔內。另用滅菌吸管分別吸取3個1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標號為7、8、9的小培養(yǎng)基孔內，標號為10的小培養(yǎng)基孔內可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對照孔使用。

5.2排氣泡：加樣后集氣窗內如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時可輕輕用力在桌面上敲擊數下排出氣泡。

5.3培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)18～24小時。

5.4觀察結果：樣液變?yōu)辄S色為產酸、集氣窗中有氣泡為產氣，產酸產氣者為陽性結果，陽性結果的孔數越多，說明污染越嚴重。

6 注意事項

6.1致病菌檢測與大腸菌檢測可同時進行；加入樣品后不需搖勻；大腸菌檢測培養(yǎng)前一定要排氣泡，排氣泡的方法與結果觀察可參見www.bjzw.com中大腸菌試劑盒使用說明中的圖像顯示；在培養(yǎng)箱中取試劑盒時注意平托出來，避免由于試劑盒的傾斜使大腸菌陽性集氣窗中的氣泡流失而影響結果判斷。

6.2試劑盒為一次性無菌包裝用品，供一次性即開即用，。

7 保存條件和有效期：避光保存于陰涼干燥處，*溫度為2～8℃，有效期18個月。

 沙門氏菌測試片使用說明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中沙門氏菌的檢測以及突發(fā)事件應急需要。沙門氏菌屬腸道細菌科，包括那些引起食物中毒、導致腸胃炎、傷寒和副傷寒的細菌。能引起食物傳播性疾病，近年來，已經成為zui常見的食物中毒原因。腸炎沙門氏菌感染通常源于奶制品、禽產品和肉產品；雞肉和雞蛋尤其是高風險食品。沙門氏菌感染的癥狀通常是腸胃出現問題，包括惡心、腹部絞痛、嘔吐和腹瀉，一般zui多持續(xù)7天。在免疫力低下的人群中，如果不及時服用抗生素類藥品，沙門氏菌感染將導致生命危險。沙門氏菌測試片（Salmonella Count Plate BS205）含有選擇性培養(yǎng)基、沙門氏菌*辛酯酶的顯色指示劑和高分子吸水凝膠，運用微生物測試片專有技術，做成一次性快速檢驗產品，一步培養(yǎng)15-24h就可確認是否帶有沙門氏菌。

2  操作方法

2.1 樣品處理：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質杯內，制成1:10的樣品勻液。

2.2 接種：將沙門氏菌測試片（BS205）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。

2.3 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內，堆疊片數不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3 結果判讀: 對測試片進行觀察，呈紫紅色的菌落為沙門氏菌；呈藍色的菌落為其他菌群。出現陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復檢驗一次。

4 附加說明

4.1有關驗證試驗表明，接純菌種（包括硫化氫陰性菌株）可以產生典型的紫紅色菌斑，其他腸桿菌呈藍色，葡萄球菌不生長。

4.2測試片具有較強的敏感性，在1.5×10^-8稀釋時仍可計算出菌落。臨床實際應用結果顯示陽性檢出率高于分離培養(yǎng)法1.84‰，復查準確率提高約13.0%（中國衛(wèi)生檢驗雜志2006,16（8）：954-955.）。

4.3注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。

金黃色葡萄球菌測試片使用說明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中金黃色葡萄球菌的檢測以及突發(fā)事件應急需要。金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus簡稱金葡菌）是人類zui常見的致病菌之一，其侵襲力很強，能產生多種致病物質如：腸毒素、凝固酶等；可引起化膿性炎癥、毒素性疾病及葡萄球菌性腸炎。金葡菌所引起的中毒事件已成為世界性的公共衛(wèi)生問題，我國每年由金葡菌引起的食物中毒事件屢有報道。金黃色葡萄球菌測試片（Staph Count Plate BT206）含有選擇性培養(yǎng)基和專一性的酶顯色劑，運用微生物測試片專有技術，做成一次性快速檢驗產品，一步培養(yǎng)15-24h就可確定出病原菌的存在。

2  操作方法

2.1 樣品處理：：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質杯內，制成1:10的樣品勻液。

2.2 接種：將金黃色葡萄球菌測試片（BT206）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。

36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3 結果判讀: 紫紅色的菌落為金黃色葡萄球菌；呈藍色的菌落為其他大腸菌群。出現陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復檢驗一次。

4 附加說明

4.1有關驗證試驗表明，金黃色葡萄球菌測試片接純菌種可以產生典型的紫紅色菌斑，普通大腸桿菌呈藍色菌落，而沙門氏菌，變形桿菌在測試片上不生長。測試片的敏感度為1.2×10^-8。通過檢測211份糕點、熟肉、鮮肉和奶制品樣品，測試片法和國標法的陽性率分別為10.43％和7.58％（中國衛(wèi)生檢驗雜志2007，17（8）：1456－1457.）。

4.2山東省疾病預防控制中心的驗證結果表明，當金黃色葡萄球菌在0～9個菌落范圍內時，測試片與血平板均能檢出，作為致病菌不得撿出的標準要求，可以作為金黃色葡萄球菌檢驗應用。

4.3注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。

副溶血弧菌測試片使用說明

1適用范圍及原理：適用于生活飲用水、水源水及食品等中副溶血弧菌的檢測以及突發(fā)事件應急需要。副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一種廣泛分布于海洋與鹽湖中的嗜鹽性細菌，海產品中常有此菌，它是引起食源性疾病的主要病原之一，是夏、秋季沿海地區(qū)食物中毒和急性腹瀉的重要病原。據國家食源性疾病監(jiān)測網統(tǒng)計，我國近年由副溶血弧菌引起的食物中毒呈顯著上升趨勢，已成為我國一個嚴重的食源性公共衛(wèi)生問題之一。該菌引起的食物中毒臨床上表現為：上腹部疼痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)熱等，腹瀉多為水樣便，亦有大便膿血，隨后腹部劇烈疼痛，持續(xù)1-2天。副溶血弧菌測試片（BH209）是一種商品化的一次性培養(yǎng)基產品，含有高選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異酶指示劑等重要成分，培養(yǎng)15～24小時就可確認是否有病原菌的存在。

2  操作方法

2.1 樣品處理：：生活飲用水及其水源水取原液。其他樣品取 25g（mL）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質杯內，制成1:10的樣品勻液。

2.2 接種：將副溶血弧菌測試片（BH209）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下，每個樣品接種兩片。

2.3 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內，堆疊片數不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h。

3 結果判讀: 呈紫紅色的菌落為副溶血弧菌。多數非目的菌在測試片上不生長，少數能生長，如創(chuàng)傷弧菌和霍亂弧菌，但菌落呈藍色，明顯區(qū)別于目的菌。出現陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復檢驗一次。

4 附加說明

4.1 汕頭出入境檢驗檢疫局技術中心的對比試驗結果表明，副溶血弧菌測試片具有較高的檢測靈敏度和準確性，對純菌的檢測靈敏度達到8cfu/mL，與SN標準方法符合率達到90%以上。

4.2 注意使用過的測試片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理 。