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為什么PCR儀在使用中會出現擴增帶異常!
閱讀:95 發布時間:2024-10-6 目前市場主流的PCR儀從使用特性上說,基本上分為常規型PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR儀以及功能相對更強大的數字型PCR儀(熒光定量PCR儀),梯度和原位PCR儀分別是在常規型的基礎上增加了原位模塊和梯度溫度的功能。具體分類,大家可以去瀏覽我司之前給大家分析過的PCR儀分類這篇文章,今天在這里就不給大家重復敘述了;本篇文章以前三種PCR儀作為案例給大家簡單分析下,后面再給大家描述數字型PCR儀異常的原因。如果我們在使用PCR儀的過程中,若出現擴增帶異常,該怎么去處理,該如何更好的去規避它呢?PCR儀廠家告訴大家PCR儀擴增條帶異常的原因
一、內在因素:(多數發生在樣品池)
①:多數蛋白質和特殊存在于染色體中的組蛋白,在樣品池中去分解和吸收,沒有被很好的去利用造成殘留。
②:引入樣品池中的蛋白純度不高或者存在污染源。
③:樣品池中殘留有酶抑制劑taq,使酶失活造成不可逆。
④:在樣品池中制備的時候,化合物中酚類容易被揮發導致實際含量低或者在樣品池中吸收過于飽和。
⑤:操作員流動性大或者沒有固定的制備程序,導致消化液的濃度成分存在差異,分解的能力差異化。
⑥:核酸的萃取工藝存在缺陷,導致樣品中濃度不足。
二、外在因素:
①:PCR儀的擴增標準是以微升(ul)為單位的,靳瀾系列PCR儀標準狀態下,多為30或者50微升;在能確定PCR擴增反應量平穩狀態下,則可繼續保持20微升的含量。具體根據操作者的經驗來確定,如不確定,當以中間為準,緩慢增加或者遞減。
②:二階離子和陽離子成分含量偏高或者偏低,影響PCR儀在擴增中的產生效率,從而導致擴增的示警。
③:若存在兩種引入物,相對濃度偏差大,較嚴重的不對稱也會降低擴增的效率。(具體在引入物的多少、引入物的成分)
④:更換活性酶,提高擴增中的活性度。
以上就是今天給大家總結的幾點造成PCR儀擴增異常的幾個因素,具體原因具體對待,歡迎致電我司
文章來源 :上海靳瀾儀器制造有限公司/